期刊简介
本刊是组织工程学和整形重建外科学的专业学术期刊，着重报道组织工程领域的基础研究，组织构建和生物材料研发，以及整形重建外科领域的重大进展、新技术和新动态。
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- 杂志名称：组织工程与重建外科杂志
- 主管单位：上海交通大学
- 主办单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院
- 国际刊号：1673-0364
- 国内刊号：31-1946/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏
增强型绿色荧光蛋白转染活细胞效率的研究
吕晓杰；周广东；马俐君；刘霞；曹谊林
关键词：增强型绿色荧光蛋白, 逆转录病毒, 细胞标记, 组织工程
摘要：目的 研究影响增强型绿色荧光蛋白(EGFP)逆转录病毒表达系统转染活细胞效率的主要相关参数,建立一种稳定高效的活细胞EGFP标记技术.方法 培养、扩增携带EGFP逆转录病毒载体的包装细胞PGl3,分别于12h、24h、36 h和48 h收集病毒液,转染骨髓基质细胞(BMSCs),通过流式细胞仪和荧光显微镜检测不同时间点病毒转染效率.选择转染率高时间点的病毒液,连续转染BMSCs两次,小剂量嘌呤霉素筛选6h,观察病毒转染率及细胞活力.再以上述方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),观察这种方法标记其他干细胞或成熟分化细胞的可行性.结果 根据流式细胞仪及荧光显微镜观察结果,24h收集的病毒液转染BMSCs效率高(64.56±2.53)％,36 h次之(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％与48 h(37.84±1.77)％相对较低.连续转染两次并经短暂筛选后,BMSCs转染率可达80％以上,且细胞活力不受影响.采用相同方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),转染率均能达到80％,且细胞形态、增殖能力均未见明显改变.结论 本实验建立了一种稳定高效的活细胞EGFP转染技术,为研究组织工程种子细胞的体内、外转归及细胞间相互作用提供了稳定且直观的检测手段.
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