期刊简介
本刊是组织工程学和整形重建外科学的专业学术期刊，着重报道组织工程领域的基础研究，组织构建和生物材料研发，以及整形重建外科领域的重大进展、新技术和新动态。
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- 杂志名称：组织工程与重建外科杂志
- 主管单位：上海交通大学
- 主办单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院
- 国际刊号：1673-0364
- 国内刊号：31-1946/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏
Cathepsin K基因siRNA的筛选及其质粒载体的构建
张艳；金蓉；刘伟
关键词：基因, 双链RNA, 质粒体
摘要：目的 筛选出对人Cathepsin K(CTSK)基因抑制效率高的1对siRNA,并通过质粒载体表达该siRNA,为进一步抑制去分化人软骨细胞中CTSK的表达奠定基础.方法 针对Cathepsin K基因设计4个靶位点,并根据靶位点合成4对siRNA,并转染人软骨细胞.通过Real-time PCR检测4对siRNA中抑制效率高的1对,与线性化的PGCsilencer-HI/Neo/GFP连接、转化、扩增与纯化质粒.结果 4对siRNA转染软骨细胞后72 h,通过对照FITC-siRNA的绿色荧光观察,siRNA的转染效率达到70%～80%.Real-time PCR检测每对siRNA的CTSK量与对照组比的百分率得到其抑制效率,分别为:第1对的比值大于对照组(无抑制作用),第2对47.5%.第3对53.1%,第4对67.3%(抑制效率大).成功构建出pGCsilencerTM H1/Neo/GFP/CTSK RNAi载体,经测序证实了克隆的RNAi打靶序列100%正确.结论 成功构建了CTSK基因的siRNAs表达质粒,为进一步研究抑制该基因表达对延缓软骨细胞的去分化过程并促进其成软骨能力奠定了基础.
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